РЕЗУЛЬТАТЫ ГЕНЕТИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ НЕТИПИЧНЫХ ОКРАСОВ
На сегодняшний день FCI признаны 344 породы собак. Каждая имеет стандарт, описывающий её морфологию и специфику, а также признаваемые окрасы (цвет, длину и текстуру шерсти). Некоторые особи, имеющие нестандартный окрас при рождении или во время взросления, не признаются экспертами породными, несмотря на известное происхождение от соответствующих стандарту родителей. Именно с целью - попытаться найти генетическое происхождение этих отклонений и дать ответ заводчикам породы, - было проведено данное генетическое исследование 55 собак породы бретонский эпаньоль в сотрудничестве с VetAgro Sup и французским породным клубом Бретонских эпаньолей СЕВ и профинансировано SCC Франции.

Экспериментальная часть работы была сосредоточена на анализе результатов генетических тестов окрасов:

• УГОЛЬНЫЙ ПОДПАЛ (соболиный),
• ТРЁХЦВЕТНЫЙ ОКРАС с (рыжей) маской,
• ПРИЗРАЧНЫЙ ПОДПАЛ.

Официальный стандарт породы, составленный в 1908 году, с обновлениями на 2003 год, определяет окрасы, разрешённые для бретонского эпаньоля.

Однако, после появления в последние годы нежелательных окрасов в породе, в 2009 году CEB Франции более точно описал окрасы, не признаваемые стандартом. В основном речь шла об окрасе угольный подпал (соболиности), призрачный подпал (пятна подпала, которые выражены неявно) и трёхцветный окрас с рыжей маской, более или менее обширной.

Несмотря на рекомендации CEB, признание этих собак породными по-прежнему зависело только от решения судей. Тем не менее, в сентябре 2020 года SCC добавил эти критерии в пункты о несоответствии экстерьера стандарту породы, чтобы помочь судьям в принятии решения. Соответствующий документ представлен в Вестнике НКП N3.

УГОЛЬНЫЙ ПОДПАЛ (СОБОЛИНОСТЬ)
Рыжевато-угольный цвет шерсти обозначает составной цвет, содержащий как эумеланиновый (чёрный или коричневый), так и феомеланиновый (рыжий) пигменты. Для этого окраса характерно наличие зональных волосков на всём теле или его части, что приводит к зачернению соответствующих участков. Количество зачернения значительно варьируется, что даёт бретонам с соболиностью большое разнообразие фенотипов.

ТРЁХЦВЕТНЫЙ ОКРАС с (рыжей) МАСКОЙ 
Эумеланиновый окрас, отмеченный пятнами рыжего подпала и зонами белого, при котором рыжие пятна образуют более или менее обширную, разлитую маску, а не ограничиваются определёнными стандартом областями.

ПРИЗРАЧНЫЙ ПОДПАЛ
Собаки имеют слабо выраженные из-за наличия чёрной шерсти в зонах подпала, расположенных на местах нормальных подпалых участков у классических триколоров, а именно: на морде, на губах, над глазами и на конечностях, на груди и вокруг крепления хвоста, согласно стандарту породы. 

Также были описаны некоторые редкие собаки с разбросанными красновато-коричневыми бликами на чёрных участках шерсти. Эти нетипичные окрасы возникли в породе бретонского эпаньоля относительно недавно, и можно предположить, что эти нежелательные цвета и рисунки могли закрепиться в результате скрещиваний с другими породами. Данная работа является попыткой найти причину появления этих новых окрасов у бретонского эпаньоля.

В этом исследовании приняли участие 55 собак - бретонских эпаньолей с племенной французской родословной, 32 суки и 23 кобеля из 43 различных питомников, но не у всех окрас соответствовал стандарту породы.

Забор образцов и извлечение ДНК.
ДНК этих собак была извлечена из образцов клеток ротовой полости с целью провести генетический тест семи аллелей окраса.

Среди 55 собак, участвовавших в исследовании, у 12 собак был нежелательный окрас, но только 10 из них были признаны не в стандарте (одна рыжая с зачернением, две призрачно-подпалые и семь триколоров).

• Одна собака с коричнево-белой шерстью дала идеальную корреляцию генотип-фенотип.

• Семь собак с чёрно-белой шерстью имели одинаковый гомозиготный генотип at/at по аллелю, отвечающему за эумелановый окрас с отметинами подпала, за исключением собаки, которая была гетерозиготна и несла аллель соболиности ау.

• Двадцать восемь собак с рыже-белым окрасом все имели одинаковый гомозиготный генотип е1/е1 в локусе Е, определяющий отсутствие эумеланина в шерстинках.

 
Обращаем внимание на наличие аллеля осветления (дильюта) dl у трёх собак, которое не было обнаружено раньше у бретонского эпаньоля (голубой bleue, бежевый beige и песочный sable), мы не ожидали обнаружить наличие аллеля дильюта у наших собак.

Однако мы наблюдали двух собак с гетерозиготным генотипом D/d1. Эти две собаки не были родственниками первой степени родства с наличием аллеля ау, отвечающего за (соболиный) окрас угольный подпал у трёх из 28 собак.

• Одна собака коричнево-белая с подпалом показала идеальную корреляцию генотип-фенотип.

• Шесть собак чёрно-белых с подпалом показали идеальную корреляцию генотип-фенотип у пяти из шести собак.

• Одна собака с угольным подпалом (соболиность) дала идеальную корреляцию генотип-фенотип и, по меньшей мере, один аллель ay в локусе A, определяющий угольный подпал (соболиность).

• Две собаки с призрачным подпалом различались по их генотипам в локусе K и гену RALY.

• Семь собак триколоров с разлитым подпалом (рыжая маска) имели вариабельный генотип в локусе В, который определяет окраску эумеланина (коричневый или черный).

•  Две собаки с чёрно-белой шерстью с коричневатыми бликами (на чёрном) получили гетерозиготный генотип ay/at по локусу А и по гену RALY, и особенно наличие аллеля Em, управляющего эумеланиновой маской в локусе E.
  Наличие этого аллеля у бретонского эпаньоля не описано. Стало открытием наличие этого аллеля у двух особей в гетерозиготном состоянии EM/e1. Эти две собаки были родственниками первой степени.

• Скрытая соболиность (частота аллеля Ay) в нашей когорте из 54 бретонских эпаньолей, не имеющих в фенотипе окраса угольный подпал (соболиность), составляет примерно 5,6% 
  Была исключена собака с угольным подпалом (соболиностью), отобранная специально из-за ёе окраса, чтобы не вносить систематическую ошибку в набор собак и не переоценивать частоту аллеля.

Соотношение генотип-фенотип для стандартных окрасов породы
Мы наблюдали идеальную и ожидаемую корреляцию генотип-фенотип для окрасов чёрно-белого, рыже-белого, коричнево-белого, чёрно-белого с подпалом и коричнево-белого с подпалом. Кроме того, мы отмечаем, что у всех 55 собак в нашем исследовании был зафиксирован генотип белой пятнистости (пегости) в гомозиготном состоянии sp/sp аллелей.

Различие между чёрным/коричневым окрасом с подпалом или чепрачным окрасом (мантия, плащ, манто) объясняется дупликацией гена RALY. Эта дупликация была выявлена у разных пород, но, по-видимому, хорошо коррелирует только с различиями в окрасе шерсти у корги и бассет-хаундов (Dreger и группа авторов, 2013). Никаких данных не было доступно для бретонского эпаньоля, который не считался породой, имеющей чепрачный окрас шерсти.
Мы наблюдали присутствие трёх генотипов в нашей когорте: 29 собак с дупликацией в гомозиготе dup/, 25 собак +/ dup и одна собака +/+.

Аллель Ау.
Мы наблюдали наличие аллеля Аy(=aу) гена ASIP у семи из 55 собак только в гетерозиготном состоянии. Следовательно, возможно, что аллель Aу попал в породу недавно в результате скрещивания (метизации) и передался только нескольким линиям бретонских эпаньолей. Для проверки этой гипотезы будет необходимо исследование гаплотипов. Потребуется генотипирование бретонских эпаньолей, несущих аллель Aу, и генотипирование по этим же маркерам когорты контрольных собак разных пород, имеющим большую вероятность скрещивания в прошлом с бретонским эпаньолем и имеющим аллель «Ау» (например, пойнтер).

Мы идентифицировали аллель d1 у двух неродственных собак. Поэтому представляется необходимым исследование в более широком масштабе, чтобы оценить частоту этого аллеля в породе и определить его происхождение: наследственный аллель или введение в результате межпородного скрещивания. Здесь также может быть полезно исследование гаплотипов, чтобы сделать выбор между двумя гипотезами.

Мы идентифицировали наличие аллеля EM у прямородственных собак. Таким образом, представляется необходимым исследование в более широком масштабе, чтобы оценить, имеется ли этот аллель в определенной линии собак или он более широко представлен в породе. Здесь также может быть полезно гаплотипическое исследование для определения происхождения этого аллеля.

Призрачный подпал или слабо выраженный триколор представляла одна собака (рис. 1). В её родословной она была зарегистрирована как триколор.

Еще одна собака (рис. 2) также была исследована и описана как призрачно-подпалая (ghost tan) с регистрацией чёрно-белого окраса в родословной. Изучение её фенотипа по фотографии выявило менее чёткие отметины, которые были гораздо более коричневыми, чем рыжими, особенно на морде.

С точки зрения опубликованных данных, собака на рис. 2 имела генотип, соответствующий генотипу чёрно-белой собаки, в то время как собака на рис. 1 имела генотип, соответствующий генотипу собаки чёрного с подпалом окраса.

Полученные данные не дали возможности связать наличие определенного генотипа с рисунком призрачного подпала из-за наличия только двух собак в нашей когорте, представляющих этот фенотип, и их различий в генотипах. Однако собака на рис. 1 показалась нам скорее обычным триколором с небольшими подпалинами, чем настоящим призрачным подпалом.

Фотография собаки с призрачным подпалом (рис. 1) из другого исследования, на которой видны призрачные отметины коричневого цвета, вместо рыжего, что позволило нам оценить разницу с собакой из нашего исследования (рис. 2).

Когда мы объединили результаты, то оказалось, что причиной здесь может быть наличие аллеля KВ: этот аллель может давать неполный эпистаз в локусе A, в частности, может позволять проявляться эумеланину с подпалом, управляемым at. Анализ бóльшего количества окрасов призрачный подпал собак породы бретонский эпаньоль и других пород может быть полезен для проверки этой гипотезы.

Трёхцветные с рыжей маской
Наличие генотипа +/dup у всех триколоров с рыжей маской, как нам показалось, согласуется с гипотезой о влиянии дупликации в RALY на различие между эумелановыми окрасами с подпалом и чепраком. Действительно, чепрачный окрас характеризовался наличием эволюционного фенотипа: щенки, которые рождаются с отметинами подпала, но чьи отметины подпала увеличиваются с возрастом, чтобы к зрелому возрасту распространиться по всей морде у некоторых собак. Более того, при эумеланиновой зоне в форме чепрака (плаща, манто), более или менее обширного в зависимости от особи, подпал также доходит до туловища. Собаки на фотографиях рис. 1 (собаки A, B и C) демонстрируют подъём отметин подпала до туловища и его распространение на голову, характерное для собак с чепрачным окрасом.

Для того чтобы подтвердить эту гипотезу об участии RALY в фенотипе триколора с феомеланиновой маской, который тогда будет соответствовать чепрачному окрасу с зоной белого в форме пятен, необходимо провести генотипирование большего числа обычных триколорных и собак с рыжей маской по гену RALY.

ВЫВОД
Наши выводы являются предварительными, но уже можно рекомендовать заводчикам, желающим избежать появления щенков с нестандартным окрасом шерсти, генотипировать своих племенных животных по локусам окраса A, E, D, K и гену RALY и избегать использования в разведении собак, несущих аллель осветления d1, аллель маски EM, который в сочетании с генотипом ky/ky может привести к отсутствию отметин подпала на лицевой части у собак at/at или к более или менее обугленному подпалу с чёрной или коричневого цвета маской у a y/- собак.

Также рекомендуется избегать вязки двух собак, несущих один аллель ky, и одной из собак, также несущей аллель Aу, что может привести к появлению щенков соболиного окраса Ау/- ky/ky. 

Прежде чем рекомендовать исключить из разведения всех собак, несущих аллель Aу, следует предварительно уточнить частоту этого аллеля в породе, которую мы оценили в 5,6% в нашей когорте, и проверить, не является ли он специфичным для одной/нескольких линий, так как было бы обидно исключить из разведения особей, интересных для породы другими своими характеристиками.

Обоснованная и прогрессивная программа отбора может быть в конечном итоге разработана после дополнительного изучения частоты аллелей d1, EM и Aу у бретонского эпаньоля.

Наконец, разработать стандарт породы, чтобы или признать чепрачный с белым окрас, или постепенно убрать дикий аллель (+) гена RALY, чтобы в конечном итоге сохранить только аллель dup, управляющий окрасом триколор. Этот вариант, конечно же, можно рассматривать только после дополнительного изучения, причем предельно осторожно, чтобы не подорвать генетический потенциал породы (не уменьшить генетическое разнообразие породы).

*Прим. переводчика: после завершения данной работы в генетике были открыты пять новых зон, так называемых промотеров, в гене Агути, которые позволили точно разделять чепрачный окрас от подпалого. Ген RALY находится в цепочке ДНК рядом с геном Агути, поэтому и является маркёром разницы окрасов чепрак/подпал, но с точностью только около 60%. Надеемся, что генетический анализ по вновь открытым локусам гена Агути даст точный ответ в разнице окрасов бретонского эпаньоля.

Из Дипломной работы на получение звания ветеринарного врача КРИСТОФЕР Милены. 

Результаты данного исследования легли в основу изменений, внесенных в стандарт FCI N095/FR от 01.09.2020 г.

Перевод Е. Тоболь